Исследования на половые инфекции методами ифа и пцр

Расшифровка теста IgM/IgG

Поскольку наиболее информативными при респираторных вирусных инфекциях являются иммуноглобулины М и G, то чаще всего акцент делается именно на эти антитела. Тест IgM/IgG проводится методом ИХА. Это качественный анализ, который показывает статус иммуноглобулинов M и G в крови.

В таблице 1 мы приводит результаты расшифровки такого теста. Знаками «+» и «-» обозначается наличие или отсутствие иммуноглобулина при тестировании.

Из всех 4-х вариантов только один (IgG (-),IgM (-)) указывает на возможное отсутствие контакта с вирусом SARS-CoV-2. Однако причины у такого результата могут быть и другие:

• Пренебрежение правилами подготовки к анализу. Методики ИФА и ИХА отличаются высокой чувствительностью. Несоблюдение правил подготовки к такому анализу может исказить результат.
• Отсутствие антител после болезни. В ряде случаев, когда ковид проходит в легкой форме, антитела могут не обнаруживаться.
• Антитела к интерферону. Примерно у 10% людей с тяжелой формой COVID-19 вырабатываются антитела к интерферону. Последний представляет собой систему противовирусных белков, которые вырабатываются при инфицировании. Так вирусу SARS-CoV-2 удается обезоружить иммунную систему пациента, лишив ее интерфероновой защиты. При таких обстоятельствах иммуноглобулины к вирусным антигенам быстро исчезают.

Наконец, если у вас характерные для коронавирусной болезни симптомы, то это не всегда COVID-19. Грипп и простудные заболевания никуда не исчезли, и люди продолжают ими болеть.

Показания к проведению ИФА-анализа

• Возможное заражение гепатитами B, C, D (дельта) – пожелтение кожи и склер, потемнение мочи, светлый кал, кожный зуд, боль в правом подреберье.
• Подозрение на инфицирование туберкулезом и ВИЧ – кашель, боли в костях, повышение температуры, ухудшение общего состояния, похудение, склонность к инфекциям, увеличение лимфоузлов, нарушение работы кишечника, появление крови в мокроте.
• Признаки сифилиса – появление язвы (твердого шанкра) на любой части тела, увеличение лимфоузлов, различные высыпания на коже и слизистой. Исследование позволяет обнаружить не только свежие, но и запущенные случаи болезни.
• Подозрение на заражение различными венерическими инфекциями. ИФА-анализ нужно сдать при возникновении боли во время мочеиспускания, выделений из уретры половых путей, различных высыпаний в интимной зоне, неприятного запаха мочи, появлении в урине мути и гноя. Методика выявляет антитела к различным возбудителям половых инфекций – хламидиям, микоплазмам, уреаплазмам.
• Подозрение на кандидоз (молочницу), проявляющийся творожистым налетом в интимной зоне, во рту, в паховых складках, области заднего прохода, а также белыми выделениями из половых путей, напоминающими свернувшееся молоко. Иммуноферментный анализ крови позволяет выявить не только наличие возбудителя, но и его концентрацию.
• Возможное заражение паразитами, проявляющееся нарушением работы кишечника, тошнотой, рвотой, анемией (малокровием), отеками, болями в мышцах, слабостью, головной болью. Метод выявляет паразитирование простейшими – лямблиями и гельминтами (глистами) – трематодами, трихинеллами, эхинококком. ИФА намного информативнее анализа кала, поскольку выявляет даже возбудителей, находящихся вне кишечника.
• Подготовка к беременности. Перед ее планированием нужно обследоваться на TORCH-инфекции (токсоплазмоз, краснуху, цитомегаловирус), приводящие к аномалиям развития плода. Обоим родителям нужно также сдать кровь на гепатит и половые инфекции. Анализы на TORCH-инфекции сдают повторно на 12 неделе беременности.
• Планируемое стационарное лечение, подготовка к оперативным вмешательствам, гинекологическим, хирургическим и урологическим процедурам. В этом случае ИФА-анализы сдаются непосредственно перед госпитализацией или операцией, поскольку срок их действия ограничивается одним-двумя месяцами.
• Донорство – всех потенциальных доноров крови и её элементов, яйцеклеток, сперматозоидов, костного мозга обязательно обследуют на сифилис, гепатит и ВИЧ.
• Прохождение различных медкомиссий, в которые, как правило, входят ИФА-анализы на сифилис, гепатиты, вирусы ВИЧ типа 1 и 2. Многие комиссии также включают исследования крови на туберкулез и ЗППП.

Врач смотрит снимок

Тошнота

Увеличение лимфоузлов

Виды антител

С началом пандемии COVID-19 многие наслышаны об иммуноглобулинах G (IgG) и M (IgM), но есть и другие виды антител. Всего существует 5 типов иммуноглобулинов:

• IgM – образуются в первые дни после инфицирования. Это антитела острой фазы². Они слабее, чем иммуноглобулины G, и быстрее распадаются. Наличие IgM свидетельствует о недавно перенесенном заболевании.
• IgG – являются частью вторичного иммунного ответа. Это антитела, которые продуцируются уже после инфекции. Они нужны на случай, если микроб вдруг еще раз «нагрянет».
• IgA – основной класс антител слизистых тканей. Это один из элементов местного иммунитета – защитных реакций на слизистых носовой, ротовой полости и горла (если речь о респираторных патогенах, таких как SARS-CoV-2)³.
• IgE – ответственны за защиту организма от паразитов. Также принимают участие в аллергических реакциях.
• IgD – наименее изученный класс иммуноглобулинов. Установлено, что IgD является мембранным рецептором. Возможно, эти антитела связываются с некоторыми белками крови, из-за чего развивается аутоиммунное заболевание.

Рисунок 2. Упрощенная схема иммунного ответа. Изображение: сайт Клуба русскоязычных ученых штата Массачусетс

Сегодня для определения антител против нового коронавируса чаще всего применяют иммуноферментный или иммунохроматографический анализы (ИФА и ИХА).

Метод ИФА считается более точным, поскольку это не только качественный, но и количественный анализ (показывает количество антител в единице объема крови). Для этого человеку нужно сдать кровь в медицинском учреждении или диагностической лаборатории.

ИХА-тестирование – это анализ по тест-полоскам. Он показывает лишь наличие или отсутствие иммуноглобулинов М и G.

Требования по забору крови для ИФА- и ИХА-метода стандартные (как и для других анализов крови):

• кровь желательно сдавать натощак;
• перед анализом не рекомендуют пить кофе, соки, чай и алкоголь;
• за час до анализа желательно также исключить воду;
• курильщика не рекомендуется курить, хотя бы за 1-2 часа до тестирования.

Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа

Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).

Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.

Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.

Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.

Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).

Анализируемый биоматериал и особенности его забора

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.

Сроки готовности результатов ИФА

При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.

Комбинированные тесты

Цель комбинированных тестов, как и вестерн-блоттинга, — определить ВИЧ-статус человека.

Они представляют собой тот же анализ ИФА, но усовершенствованный — «два в одном». Тест позволяет определить не только человеческие антитела к вирусу ВИЧ, но и вирусный антиген — белок p24. Из этого белка состоит внутренняя оболочка вируса — нуклеокапсид, о котором мы говорили выше.

Комбинированные тесты на ВИЧ тоже бывают «домашними» и лабораторными.

●        Пример «домашнего» комбинированного экспресс-теста — анализ Alere HIV Combo. Этот анализ можно сделать по крови из пальца (по сыворотке тоже, но годится и «простая» кровь), а результаты известны уже через 20 минут.

●        Пример лабораторного комбинированного теста — HIV Ag/Ab Combo, который делают в частных лабораториях за деньги.

Что важно знать об этом тесте? Этот анализ относится к четвертому поколению. На сегодняшний день во всем мире именно он считается оптимальным способом выявления инфекции, потому что недорог и позволяет относительно рано узнать ВИЧ-статус клиента

Если речь идет об определении ВИЧ-статуса, то в Европе и США чаще всего прибегают именно к комбинированным тестам. Если тест дает положительный результат, нет необходимости проводить подтверждающий анализ, его просто через некоторое время сдают повторно — и это считается достаточно надежным.

Дело в том, что антиген — вирусный белок р24 — появляется в крови уже в первую неделю после заражения, то есть задолго до того, как вырабатываются антитела. Поскольку комбинированный тест определяет антиген, шанс узнать свой статус есть уже через 21—28 дней после предполагаемого инфицирования.

После того как начинают вырабатываться антитела, вирусный белок р24 из крови пропадает. Иногда это происходит уже на вторую неделю, но у 90—95 % инфицированных людей антитела появляются в крови в первые три месяца после заражения.

Предсказать, когда именно появятся антитела, невозможно, ведь организм каждого человека по-своему реагирует на вирус ВИЧ. Но даже если антиген р24 из крови успеет исчезнуть, комбинированный тест найдет если не р24, то как минимум антитела, и все равно даст верный ответ.

Сфера применения

ИФА используют в таких диагностических целях:

• диагностика вирусных инфекций (гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция и др.);
• передающиеся половым путем инфекции (гонорея, хламидиоз, уреаплазмоз и т.п.);
• сифилис;
• онкомаркеры;
• диагностика аллергии, а также иммунодефицитных состояний.

Молекулярная диагностика коронавируса (ПЦР)

Важнейшим лабораторным методом является ПЦР в биоматериале, взятом из дыхательных путей (мазок из носа и ротоглотки).

Суть метода ПЦР заключается в том, что генетическая информация вируса (РНК) многократно копируется в лабораторных условиях специальным прибором – амплификатором, увеличивая свою концентрацию в два раза в каждом цикле копирования. Это дает возможность выявить вирус или бактерию даже в тех случаях, когда его количество составляет лишь сотню клеток в миллилитре крови. Если генетическая информация тестируемой бактерии или вируса в пробе отсутствует, то она не копируется и не определяется. 

Анализ методом ПЦР обычно проводится тем, у кого есть симптомы респираторного заболевания или тем, кто имел контакты с возможным источником инфекции.

Отсутствие генетического материала возбудителя (отрицательный результат) означает, что человек не инфицирован на момент взятия анализа. Для подтверждения или исключения наличия инфекции тест выполняется повторно через определенные промежутки времени.

ПЦР-диагностика используется для установления факта заболевания коронавирусом. Вирус можно обнаружить сразу после заражения, даже если у пациента еще нет проявлений болезни. Анализ уместно сделать, если вы контактировали с носителем инфекции или находились там, где было возможно заражение. Он также используется для подтверждения диагноза.  

Однако молекулярные РНК-тесты не являются абсолютно надежными и могут у значительной части в действительности инфицированных пациентов дать отрицательный результат. Это зависит от достаточности содержания вируса в материале выбранной локализации на той или иной стадии инфекции, качества взятия материала, предела чувствительности теста, присутствия ингибиторов ПЦР и пр. Поэтому в диагностике особое значение придается характерной картине КТ. В дополнение к этим исследованиям и клинической оценке могут быть полезны исследования, направленные на выявление в крови специфических антител, вырабатываемых организмом против SARS-CoV-2. 

Нет, мы не хотим вас запутать. Если тест отрицательный, но симптомы присутствуют, не надо читать статьи, нужно обратиться к врачу. Специфику течения любой инфекции никто не отменял. Врач будет использовать дополнительные методы исследования и ставить диагноз. Не занимайтесь самодиагностикой. Для этого нужно было закончить медицинский ВУЗ.

У нас в клинике вы можете пройти исследование РНК коронавирусов SARS-CoV-2 (COVID-19), SARS-CoV и MERS-CoV методом ПЦР (качественное определение). Тест-система разработана в ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. Чувствительность используемой тест-системы составляет 103 копии плазмид на миллилитр (10*3). 

Тестирование на наличие антител к коронавирусу COVID-19

Аналогично другим вирусным инфекциям, Коронавирус стимулирует гуморальный и клеточный иммунный ответ (IgM и IgG) . После вторжения вируса в организм, в крови больного начинают появляться сначала иммуноглобулин класса M (IgM), позднее – иммуноглобулин класса G (IgG), после чего активируется иммунитет и клетки иммунной системы атакуют собственные клетки, зараженные вирусом.

Для получения ответа на вопрос инфицирован ли пациент в данный момент, подвергался ли человек воздействию вируса  и развился ли у него иммунный ответ, необходимо применение тестов на выявление антител (Ig G, Ig M, Ig A) к конкретному вирусу. В основе таких тестов лежат методы иммуноферментного анализа (ИФА), иммунохроматографии (ИХА) и их аналогов.

Антитела класса М появляются в острой фазе заболевания и снижаются после выздоровления. Антитела  класса  G  появляются на 7 сутки от начала заболевания  и держатся длительное время, продолжительность этого времени еще неизвестна.

По наличию и уровню IgM антител в крови можно судить о текущей или недавно перенесенной инфекции. Антитела IgM появляются уже через несколько дней после первых проявлений болезни (на 2-3 сутки от начала заболевания), их концентрация достигает максимума на 7-10 сутки от начала заболевания и определяются в крови 1- 1,5 месяца. IgM первым вырабатывается среди всех иммуноглобулинов при контакте организма с инфекцией, поэтому их называют иммуноглобулинами первичного иммунного ответа. Их присутствие в крови свидетельствует об острой стадии инфекционного процесса.

Специфические IgG антитела обычно присутствуют в крови длительное время и после выздоровления и могут выполнять защитную роль. Поэтому исследование уровня специфических IgG к SARS-CoV-2 может помочь для прогноза вероятного наличия иммунной защиты в результате перенесенной инфекции. Таким образом, определение IgG не используется при ранней диагностике инфекции – он обнаруживается в крови через две недели от начала заболевания, пик его определяется через месяц и продолжительность определения его пока неизвестна.  IgG определяет появление иммунитета в дальнейшем.

Для первичного прохождения исследования на антитела, рекомендуется выявление в крови одновременно IgM и IgG антител.

У нас в клинике вы можете пройти экспресс-тестирование за 15 минут методом ИХА или сдать кровь на анализ на антитела методом ИФА. Мы работаем только с аккредитованными Роспотребнадзором лабораториями. 

Имунно-ферментный анализ

Иммуноферментный анализ в ветеринарной клинике представляет собой вид ветеринарного лабораторного исследования, в основу которого положена иммунологическая реакция по типу «антиген-антитело». Своё название иммуноферментный анализ получил благодаря использованию ферментативной метки, которая вводится в один из компонентов иммунологической реакции.

При взаимодействии специфического антитела с антигеном происходит активация фермента, и количество образованных продуктов цветной (ферментативной) реакции, (интенсивность их окрашивания), позволяет оценить количество антигенов или антител во взятом для исследования материале. Таким образом, иммуноферментный анализ позволяет провести качественную и количественную диагностику определённой инфекции.

Ветеринарный иммуноферментный анализ отличается высокой специфичностью и разнообразием используемых тест-систем. Для данного вида исследования в качестве материала используется плазма или сыворотка венозной крови кошки, собаки или другого животного.

Чаще всего иммуноферментный анализ применяется для выявления в крови антител, которые вырабатываются иммунной системой животного в ответ на попадание в организм антигенов возбудителей различных заболеваний. Однако при помощи данного метода исследования можно выявлять и антигены возбудителей всевозможных инфекции в данной биологической жидкости.

Метод иммуноферментного анализа используется для диагностики различных заболеваний вирусной и бактериальной природы, для выявления антител, определения уровня гормонов и для нахождения маркеров онкологии.

Специфичность и чувствительность данного ветеринарного лабораторного метода оценивается  в 90% — 100%.

Выявление методом иммуноферментного анализа антигена возбудителя того или иного заболевания, в отличие от вирусологических и бактериологических методов исследования, не зависит от его жизнеспособности. То есть антигены будут найдены при помощи тест-систем ИФА и в том случае, если возбудитель продолжает свою жизнедеятельность, и тогда, когда в результате лечения или за счёт внутренних резервов организма возбудитель был обезврежен.

Вместе с тем отрицательный результат при выявлении антител к антигенам возбудителя той или иной инфекции не может быть гарантией того, что животное здорово, так как иммунный ответ формируется в течение определённого времени, что и определяет рекомендации проводить иммуноферментный анализ в динамике, как минимум дважды через временной промежуток, составляющий две-три недели.

Нельзя забывать и о том, что возможны ситуации получения ложноотрицательных и ложноположительных результатов, поскольку выявление иммуноглобулинов свидетельствует о наличии антител к возбудителю заболевания, а не о присутствии в организме самого возбудителя.

Посредством специальных тест-систем иммуноферментного анализа можно выявлять как антитела, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов, так и проводить количественный анализ иммуноглобулинов определённого класса.

Среди неоспоримых преимуществ данного метода диагностики широкий спектр выявляемых с его помощью инфекций, быстрота проведения лабораторного исследования; относительная простота методики; возможность осуществления объективной оценки силы иммунного ответа организма на антигены возбудителя, установление фазы инфекционного процесса, отслеживание динамики иммунного ответа.

Заключение

Антитела – одна из составляющих гуморального иммунитета. Это иммуноглобулины плазмы крови, которые нейтрализуют антигены или привлекают для этого другие специализированные клетки иммунитета. В случае с коронавирусной болезнью в диагностических целях определяют иммуноглобулины М, G и А. Наличие IgМ и IgА говорит об острой фазе заболевания или периоде выздоровления. IgG появляются позже, поэтому их наличие указывает на то, что человек встречался с вирусом SARS-CoV-2.

У теста на антитела имеются и свои недостатки, среди которых:

• Неоднозначность результатов. Отсутствие антител вовсе не означает отсутствие болезни в анамнезе. Иммуноглобулины со временем исчезают. При этом сохраняется клеточный иммунитет, который продолжает защищать переболевшего или вакцинированного человека. Однако, если через месяц после болезни или инфекции антител нет, то наличие клеточного ответа маловероятно. То есть нет прямой и точно известной корреляции между титром антител и степенью активации цитотоксического клеточного звена, но есть зависимость по типу да-нет.
• Погрешности. Точность такого тестирования оставляет желать лучшего. Малое количество антител достоверно определяется с трудом.

Помните, что и при наличии антител нет 100%-й гарантии избежать заражения. Поэтому продолжайте носить маски, соблюдайте дистанцию и другие профилактические рекомендации.